应用滤袋技术测定中性洗涤纤维（NDF）的方法

Ringbio纤维分析仪

A. 试剂

(a)称取30.0g十二烷基硫酸钠（USP）；18.61g 乙二胺四乙酸二钠（Na₂EDTA）；6.81g四硼酸钠（Na₂B₄O₇）十水；4.56g磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）-无水；10.0 ml三甘醇C₆H₁₄O₄；全部溶解在1L水中，适当的搅拌和加热有助于溶解。检查适当的pH在6.9—7.1。

(b) α-淀粉酶(Alpha-amylase) –热稳定细菌α-淀粉酶：活性为17,400 单位/ mL。1个活性单位表示能将1 mg可溶性淀粉用30 min水解。

(c) 无水亚硫酸钠（Na₂SO₃）。

(d) 丙酮：无色，并且蒸发后无残渣。

B. 安全注意

(a) 丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋*干燥，丙酮*挥发。

(b) 十二烷基硫酸钠对黏膜有刺激，因此操作时要带防尘口罩和手套。

C.设备

(a) 消化装置- Ringbio纤维分析仪

(b) 滤袋- Ringbio滤袋

(c) 封口机

(d) 干燥器

(e) 分析天平-至0.1mg

(f) 电热干燥箱

(g) 耐溶剂记号笔

D. 步骤

(a) 滤袋和样品的准备

1) 用耐溶剂的记号笔给滤袋编号，称重(m ₁)。

2) 直接准确称取0.5g (± 0.05 g )制备好的样品 (m) 于滤袋中。样品需要粉碎过1mm筛。

3) 在距离滤袋上边缘大约4 mm用封口机封口。然后将样品在滤袋中展平，均匀分布。

4) 至少取一个空白滤袋(C₁)，同时做空白测定。

5) 一次 多可以在滤袋架上放24个滤袋。无论放置滤袋数量多少，8层滤袋架上托盘要全部使用，每层放三个滤袋。层与层之间错开120度。然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，然后将金属压锤放在支架顶部，以确保消煮过程中不浮起。

6) 样品含有大豆产品或脂肪超过5% ，将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋*浸没，盖好盖子。摇动容器10次，浸泡10 分钟。然后更换新的丙酮，重复上述操作一次。 后将滤袋取出，放在网筛上凉干。

例外：烘烤大豆，由于烘烤大豆的特殊性，需要采用改进后的下面脱脂方法。将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋*浸没，盖好盖子。摇动容器10次，然后更换新的丙酮，浸泡12小时。取出滤袋，放在网筛上凉干。

(b) 当处理24个滤袋时，向2000 mL中性洗涤剂溶液中加无水亚硫酸钠20 g (0.5 g/50 mL ND 溶液) 和 4.0 g 热稳定α-淀粉酶。让无水亚硫酸钠在溶液中充分溶解。向容器中加入该溶液。如果处理样品少于20 个滤袋，按照每个滤袋加100 mL酸溶液，但不能少于1500 mL，确保滤袋托盘*浸没。

(c)  打开HEAT+AGITATE开关，确保滤袋支架搅拌正常。盖上盖子并*密封好。 仪器将加热并维持溶液温度100°C。 设置处理时间75分钟，包括加热升温时间。

(d) 时间到后加热搅拌自动关停，消煮结束，按下EXHAUST按键，排出废液，在打开盖子之前一定将热的溶液排完。

*警示：消煮器中的溶液是有压力的。 在打开盖子之前一定将废液阀打开以释放压力。

(e) 溶液排完后，打开盖子，关闭排液阀，加2L (70°C~90°C) 蒸馏水，并且第1和第2次淋洗时同时加α-淀粉酶，放下盖子，但不旋紧。按下FLUSH按键，搅拌3~5 分钟。按下EXHAUST按键，排掉废液，重复2次，共淋洗3次。

(f) 后一次淋洗后，加冷的自来水以操作和使冷却容器，为下轮测定做好准备。排干水，从容器中取出带滤袋的支架。将滤袋从滤袋支架上取下来，轻轻挤压去掉多余的水。然后将滤袋放入250 mL 烧杯中，加丙酮至浸没滤袋，浸泡3~5 分钟 ，然后取出并轻轻挤压去掉多余的丙酮。

(g) 在通风橱中展开滤袋，让其自然干燥。*干燥后放入102°C±2°C 烘箱烘干4小时。

*警告：在丙酮*挥发掉之前不能把滤袋放入烘箱中。

(q) 从烘箱中取出滤袋，直接放入干燥器中冷却至室温，然后称重（m₂）。

E. 计算

试样中中性洗涤纤维质量分数按以下公式计算。

NDF (%) = (m2- (m1 x C1)) x 100 / m

其中： m1 为空袋质量，g；m为样品质量，g；m2 为提取处理后样品残渣+滤袋质量，g；C1 为空白袋子校正系数(烘干后质量/原来质量)。